کشت سلولی چیست؟
کشت سلولی یعنی نگهداری سلول‌های جانوری بیرون از بدن در محیط مغذی کنترل‌شده. دو شکل کلی دارد: سلول چسبان که برای رشد به سطح نیاز دارد و سلول سوسپانسیون که آزادانه در محیط شناور است.
رده‌های سلولی جاودانه توان پاساژ نامحدود دارند؛ سلول‌های اولیه گرفته‌شده از بافت، عمر محدودی دارند اما رفتارشان به بافت مبدأ نزدیک‌تر است.
محیط کشت و ملزومات
محیط پایه، سرم جنینی گاوی به‌عنوان منبع فاکتورهای رشد و در صورت نیاز آنتی‌بیوتیک اجزای اصلی‌اند. انکوباتور شرایط ۳۷ درجه سلسیوس و ۵ درصد دی‌اکسید کربن را نگه می‌دارد تا pH محیط با بافر بی‌کربنات تنظیم بماند.
| محیط | کاربرد متعارف |
|---|---|
| DMEM | رده‌های چسبان فیبروبلاست و اپیتلیال |
| RPMI 1640 | رده‌های لنفوئیدی و سوسپانسیون |
| DMEM/F-12 | سلول‌های حساس با نیاز تغذیه‌ای بیشتر |
| MEM | کشت‌های پایه و کم‌هزینه |
پاساژ و شمارش سلول
وقتی سلول‌ها حدود ۷۰ تا ۸۰ درصد سطح فلاسک را پوشاندند، زمان پاساژ است. سلول چسبان با تریپسین جدا میشود، در محیط تازه رقیق شده و به فلاسک جدید منتقل میشود. شمارش با لام نئوبار و رنگ حیات انجام میشود تا تراکم کشت بعدی دقیق باشد.
تأخیر در تعویض محیط یا پاساژ بیش از حد، کیفیت سلول را پایین می‌آورد؛ زمان‌بندی را بر اساس رفتار رده خودتان تنظیم کنید.
کنترل آلودگی
آلودگی، شایع‌ترین علت از دست رفتن پروژه‌های کشت سلولی است؛ این چهار عادت را جدی بگیرید:
- داخل هود فقط وسایل لازم را بگذارید و سطوح را با الکل ۷۰ درصد ضدعفونی کنید.
- هر رده را با ابزار جداگانه کار کنید و پاساژها را ثبت کنید تا آلودگی متقاطع پخش نشود.
- محیط و سرم را پیش از مصرف از نظر کدورت و تاریخ انقضا بررسی کنید.
- آلودگی مایکوپلاسما را دوره‌ای با آزمون PCR غربال کنید؛ این آلودگی زیر میکروسکوپ دیده نمی‌شود.
کاربردها و محدودیت‌ها
کشت سلولی بستر سنجش سمیت، بررسی بیان ژن و تولید پروتئین نوترکیب است؛ آزمون‌های زنده‌مانی مانند MTT روی همین بستر اجرا می‌شوند. محدودیت‌ها: با پاساژ زیاد رفتار سلول تغییر می‌کند، آلودگی می‌تواند پروژه را متوقف کند و ریز‌محیط واقعی بافت در ظرف کشت بازسازی نمی‌شود.
بااین‌حال برای غربالگری اولیه، تکرارپذیری و هزینه قابل قبول، هنوز نخستین انتخاب بسیاری از آزمایشگاه‌هاست.
سفارش خدمات کشت سلولی از دستوا
آزمایشگاه سلولی زیست‌فناوری دستوا در مجموعه خدمات آزمایشگاهی خود، نگهداری رده، پاساژ، شمارش و سنجش زنده‌مانی را برای پژوهشگران ارائه می‌دهد. فهرست کامل در کاتالوگ آزمون‌ها در دسترس است.
برای تحویل رده سلولی یا شروع پروژه، فرم درخواست پیش‌فاکتور را پر کنید؛ شرایط نگهداری و زمان‌بندی را هم از صفحه خدمات دستوا بپرسید.